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ELISA试剂盒技术在科研实验中的发展历程
发布时间:2016-12-10   点击次数:1036次

ELISA试剂盒技术在60年代提出,因为具有灵敏度高、特异性强,酶免疫试剂的性质比较稳定,操作方法简便快速、无放射性污染以及应用范围广等很多优点,ELISA试剂盒迅速在医学基础理论研究,临床病毒学和生物化学检验等工作中获得了广泛的应用。这篇文章中Lequin博士追述了EIA和ELISA技术的发展历程。

    当初我们在Oranon开展这个项目的初衷只是由于当时Oranon管理部门热衷于 多年前 免疫化学诊断妊娠的成功(以血清抑制凝集试验和乳胶凝集试验 为基础)。但是由于工程太大 ,需耗时较多而阻止了该项技术的的深入发展。Schuurs提出将酶附着于抗原或者抗体,通过化学反应的测定终产物颜色这一设想时,大家都表示了赞同。因为以 一种 简易的可以根据颜色变化而即插即读的试纸条作为基础,似乎可以取得进一步的成功。我们采用了分析妊娠HCG来作为我们研究的模型。尽管如此,Schuurs对于这项技术将来的应用仍然非常清楚。正象他在试验建议的zui后一句话所说的那样:我认为,探索这项技术所取得的任何成功,都将开辟免疫学诊断的新领域。

    早期的研究过程中我们至少在试验原理上还是取得了一定的进展,但是尽管我们尽zui大努力去发展以ELISA试剂盒技术为基础的根据颜色变化而诊断妊娠的即插即读的技术时,还是失败了。将许多必需的试剂压缩到一个试纸条上,并且在模板上使反应过程标准化,在那个时间看起来还需要解决很多技术问题。实际上,在Oranon研究组发现了溶胶颗粒免疫测定(SPIA)技术发明后,依靠颜色变化诊断妊娠的问题也就变得可行了。总结以前的研究经验,我们改变了原来的研究方向。如内分泌领域(我们的目的是直接想同RIA竞争),感染病领域。zui初是检测乙型肝炎检测,该领域在前些年澳抗被作为乙型肝炎病毒感染的标志物被发现后就进行了一些探索。

    同时,我们也借鉴学习了Engvall和Perlmann以及随后的学者开展的关于ELISA和EIA的研究,而我们主要的研究领域是细菌、寄生虫和病毒,尤其是London的Voller、Bidwell以及荷兰国家公共卫生研究所的Ruitenberg所做的工作。当时领域内所使用的方法如免疫荧光,血清凝集实验,补体结合实验比较的笨拙,相比较而言ELISA和EIA法的简易性决定了它将来在广泛的微生物感染诊断中能够获得快速的发展。能够迅速为大家所接受,促进了众多的生物医学实验室和第三世界的国家建立了一种可靠的感染性疾病诊断方法。

    当时,这种方法只被局限地应用于少数高度专业的实验室。Voller和Bidwell首先应用了96孔微板用于EIA/ELISA实验,也就是现在广泛应用的ELISA试剂盒的雏形,由此也引发了*次免疫分析自动化的浪潮。我们在Oranon也使用了这种方法检测乙型肝炎和其他献血筛查项目。

    RIA法及早进入内分泌学和肿瘤学方面的应用领域并且趋于成熟,它的性和灵敏度也超过了兴起不久的EIA和ELISA技术,而且很多实验室都已经配备了放射性核素的相关设备,并且习惯了与之开展工作,他们还不能意识到非同位素检测的优势。是自动化改变了这些,RIA的自动化牵涉到放射性同位素引起的容器和废物处理问题,而EIA和ELISA却使全自动随机存取的免疫分析系统成为可能,该系统正是80年代诊断仪器制造商努力开拓的方向。这就导致了许多低成本的、设备简单,可靠性强的免疫化学诊断方法从专业的放射性实验室进入了普通化学实验室。EIA和ELISA也因此找到了他在诊断感染性疾病以外的应用领域。

    Oranon管理部门处理所采用的策略,也是EIA和ELISA试剂盒技术取得成功的决定性因素。70年代中期,众多公司汇集于Oranon,都希望得到当局的许可。管理层在经过长时间的讨论后,决定不垄断该技术,而是将该技术转让给任何达到了许可条件的公司,因为该技术在实验室诊断医学中已经广泛应用,并且不断扩展,后来总共一百多张许可证的数据来说明当时的情况是十分贴切的。我相信这项措施对实验室诊断医学是有所帮助的,有时候也会设想,当其他公司为zui近一项重要的技术而采用了一种相同的许可政策时,在将来会获得怎样的进展,产生怎样的影响。

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